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ICU临床细菌学检验和药物敏感试验结果解读PPT课件
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    这是ICU临床细菌学检验和药物敏感试验结果解读PPT课件下载,主要介绍了标本的采集运送、评价和细菌学检查方法;病原体耐药性检测;药物敏感试验;耐药机制;常见耐药菌的耐药检测,欢迎点击下载。

    临床细菌学检验 与药物敏感试验结果解读 讲课提纲 标本的采集运送、评价和细菌学检查方法 病原体耐药性检测 药物敏感试验 耐药机制 常见耐药菌的耐药检测 第一部分 标本采集方法 ①采血时机: 发热初期和高峰期采血 ② 采集部位: 肘静脉或其他部位静脉 ③ 采血次数: 2~3次/ 24h ④ 采血量:成人10~20ml,婴儿和儿童1~5ml blOOd bottle ⑤注入血液培养瓶 Aerobic bottle Fungal bottle Anaerobic bottle (2)脑脊液与其他无菌体液 严格消毒采集部位 无菌方法采集标本 可直接接种于血培养瓶中增菌 怀疑为脑膜炎奈瑟菌、肺炎链球菌、流感嗜血杆菌感染的标本应该保温运送或床边接种。 ③对痰质量的评价 细胞数/低倍视野 级别 白细胞 扁平上皮细胞 6 <25 <25 粒细胞减少者? 5 >25 <10 4 >25 10~25 3 >25 >25 2 10~25 >25 不合格 1 <10 ≥25 (4)不适合做厌氧菌培养的标本 有正常菌群存在的部位: 鼻咽拭子 齿龈拭子 会阴部拭子 阴道拭子 宫颈口拭子 第二部分 鉴定方法: 1、全自动微生物系统(AMS--VITEK) 2、病原体抗原检测 用已只抗体检测未知抗原如:乳胶凝集试验(latex coagulation test)检测细菌 3、病原体核酸检测 分子生物学法: PCR、基因芯片 DNA hybridizition技术(军团菌、衣原体、支原体、病毒等) 测序 4、鉴定结果报告及分析 1)、细菌、真菌的种名 2)、尿细菌培养:细菌计数:100----10000------100000 CFU/ml,细菌、真菌的种名 3)、分子生物学法:定性,定量 4)、临床意义:结合临床分析 感染?污染?尿细菌计数G- 100000 CFU/ml G+球菌10000CFU/ml 5)台湾 第三部分 抗菌药物敏感性试验与 病原体耐药性检测 抗菌药物敏感性试验 耐药机制 常见耐药菌的耐药检测 一、抗菌药物敏感性试验(antimicrobial susceptibility test,AST)--简称药敏试验 药敏试验 体外检测抗菌药物抑制或杀灭细菌的能力,即检测细菌对抗菌药物的敏感性。 (一)药敏试验的目的 1、预测抗菌药物治疗的效果     S/R? 抗菌药物 细菌 指导临床合理选药 2、更换抗菌药物时,预测拟选药物的疗效 S/R ? (二)药敏试验用药的选择 选药原则: 根 据美 国CLSI(Clinical and Laboratory standards institute) 抗 微 生 物 药 物 敏 感 试 验 的 执 行 标 准 进 行(简称指南) 。 指南将抗菌药物分成A、B、C、U四组。 A组:常规药敏试验的首选药物。 B组:次首选药物,对A组同类过敏、耐药、多细菌感染、多部位感染。流调的需要。 C组:补充性抗菌药物。对数种基本药物耐药菌株或对基本药物过敏者。(氯霉素 肠球菌 ) U组:仅用于泌尿道感染的药物。(呋喃妥因、某些喹诺酮类)。 在 非 苛 氧 菌 中 的 药 物 分 组(A、B、C、U) 在苛氧菌中的药物分组(A、B、C) 由表看出: 不 同 种 类 的 病 原 菌 选 择 药 物 种 类 不 完 全 相 同 ( G+、G-菌、非苛氧菌、苛氧菌) 选 择 有 代 表 性 药 物 做 药 敏 试 验,在代 表 性 药 物 同 类 中 选 择 一 、两种药物(如何读取检验报告举例)。 不 同部位(尿路与其他部位)选 择 药 物 不 完 全 相 同 (三)药敏试验结果表示及临床意义 1.敏感(susceptible,S) 是指当使用常规推荐剂量的抗菌药物进行治疗时,该抗菌药在患者感染部位通常所能达到的浓度可抑制该感染菌生长。 2.耐药(resistant,R) 是指使用常规推荐剂量的抗菌药物进行治疗时,该抗菌药在患者感染部位达到的浓度不能抑制该感染菌生长; 或者该药对该感染菌临床疗效尚未在以往治疗研究中可靠; 或抑菌圈直径落在特定细菌发挥耐药机制的合适范围。 3.中介(intermediate,I) 中度敏感(moderately susceptible),对于毒性低的药物可加大剂量(高于正常治疗浓度)给药,但是对毒性大的不能用。或者用于药物生理性浓集的感染部位如尿。 缓冲区(buffer zone),防止因实验室技术因素造成的误差,特别是对安全范围窄的药物(治疗浓度接近中毒浓度)。重复试验。 4.剂量依赖敏感(susceptible-dose dependent,SDD) 是指抗菌药对感染菌MIC接近该药在血液和组织中浓度,感染菌临床应答率可能低于敏感菌;若某药在高剂量使用时安全,则中介意味高剂量给药可能有效。主要用于真菌药敏试验。 5.不敏感 新药问世,无耐药株,只有敏感折点,当MIC值高于敏感折点时,报告不敏感。 血药浓度与MIC之间的关系 (四)常用药敏试验方法 及其临床应用 常用药敏试验 纸片扩散法 最小抑菌浓度的测定法 E-试验法 抗菌药物联合药敏试验 1.纸片扩散法(Disk difusion method) (定性) (1)方法: (2)结果报告:敏感(S)或中介(I)、 耐药(R) 根据: 参照美国CLSI/NCCLS制定的标准读取结果。 敏感限=breakpoints(分界点) 抑菌圈直径≥敏感限 S ≤耐药限 R 敏感限与 耐药限之间 I (3)临床意义 根据患者病情选择“S”药物的种类 不能选用“R” 药物 “I”某些药物如β-内酰胺类,加大药物剂量能达到治疗目的,或该药在感染部位浓度很高(尿液中喹诺酮类)。 2.最小抑菌浓度(minimum inhibitory concentration,MIC)的测定(定量) (1)方法:肉汤稀释法 琼脂稀释法 抗菌药物 倍比稀释 琼脂平板 (2)结果报告:MIC值 根据:CLSI 指南判断结果 例如: 苯唑西林(MIC μg/ml) S R 金黄色葡萄球菌 ≤2 ≥ 4 凝固酶阴性葡萄球菌≤0.25 ≥0.5 (3)临床意义 根据病情选用不同种类MIC值小的 “S”药物 3. E-test法 (1)E-test法是浓度梯度纸条扩散法, MIC测定 (2)方法:操作按纸片扩散法 (3)结果报告:同稀释法, MIC值 (4)临床意义 “S” 、“R”、 “I” 药物的应用同前述 优点:各种细菌(苛养、非苛养、生长快的、慢的细菌)及厌氧菌、真菌的MIC测定。对重症感染病人选药治疗极为重要。 4. 抗菌药物联合药敏试验 (1)目的:是测定两种抗菌药物联合应用时的抗菌效果 (2)方法:纸片扩散法和稀释法 (3)计算FIC指数: 部分抑菌浓度指数(fractional inhibitory concentration,FIC) FIC指数=A药联合MIC/ A药单测MIC+B药联合MIC/B药单测MIC 结果 : FIC指数 <0.5 协同 FIC指数 0.5~1 相加 FIC指数 1~2 无关 FIC指数>2 拮抗 抗菌药物的PK/PD理论 抗菌药药效动力学参数 最小抑菌浓度(minimum inhibitory concentration , MIC 最小杀菌浓度(minimum bactericidal concentration , MBC) 抗生素后效应(postantibiotic effect ,PAE) 亚抑菌浓度下的抗生素后效应(PA SME) 抗菌素后白细胞活性增强效应 (Postantibiotic Leukocyte enhancement,PALE) 杀菌曲线(time-kill curves) (4)临床意义 (β-内酰胺类+氨基糖苷类====协同) 提高疗效 减少药物毒性 减少耐药菌发生。 二、细菌耐药主要机制 细菌水平和垂直传播耐药基因的整合子系统 产生灭活抗菌药物的水解酶和钝化酶 细菌的抗菌药物作用靶位的改变 细菌膜外排泵系统 细菌生物膜的形成 三、常见耐药菌的耐药检测 耐药菌增加的原因 耐药菌产生增加(抗生素选择性压力):由于医生过多地使用抗生素,造成对基因突变及耐药基因转移的耐药菌进行了筛选 耐药菌传播增加:通过医护人员尤其手的接触,细菌在病人间交叉寄生造成耐药菌株在医院内的传播,以及随后通过宿主病人的转移,耐药菌在医院间甚至社区进行传播 超级细菌?多重耐药菌 MRSA--耐甲氧西林金黄色葡萄球菌 VRE---耐万古霉素的肠球菌 ESBLs--产超广谱β内酰胺酶 MDR-AB—多重耐药鲍曼不动杆菌 MDR-PA--多重耐药铜绿假单胞菌 产NDM-1细菌 ——耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌 WHO对NDM-1的评估与建议 强化医务工作者和公众合理使用抗生素的相关政策 加强细菌耐药性监测 严格执行预防和控制措施,实施医院感染控制措施,控制多重耐药菌株的传播; (二)细菌的耐药性监测方法 常见耐药细菌的 英文简称的含义: MRSA(耐甲氧西林金黄色葡萄球菌 MRCoNS VRSA(耐万古霉素金黄色葡萄球菌) ESBLs (超广谱-内酰胺酶) SSBLs(超超广谱-内酰胺酶)= ESBLs+AmpC 肠球菌低耐庆大霉素菌株,可-内酰胺类联合氨基糖甙类治疗; 高耐庆大霉素菌株,可用万古霉素 一)细菌耐药表型的检测 1.β-内酰胺酶的检测 ①β-内酰胺酶试验采用色原法,挑取菌落涂在含有色原头孢菌素头孢硝噻吩的试纸片上,若试验菌产β-内酰胺酶,则头孢硝噻吩被水解,纸片有黄色变成红色。 β-内酰胺酶试验阳性提示对青霉素酶不稳定的青霉素(如青霉素、氨苄西林等)耐药。常规需做β-内酰胺酶试验菌株有葡萄球菌属、肠球菌属、流感嗜血杆菌、卡他莫拉菌以及其他革兰阴性厌氧菌。 ②超广谱β-内酰胺酶的检测(ESBLs) 由革兰阴性杆菌产生,质粒编码,其活性可被β-内酰胺酶抑制剂(如克拉维酸)抑制。ESBLs检测包括筛查试验和确证试验。 ESBLs阳性提示该菌对青霉素类、头孢类和单环类抗生素耐药。常规检测ESBLs的细菌包括大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、产酸克雷伯菌和奇异变形菌。 ③头孢菌素酶检测 可水解青霉素类、头孢菌素类、头霉素类和单氨类,不能水解碳青霉烯类和四代头孢。 ④ 金属酶检测 可水解单氨类抗生素和碳青霉烯类等各种β-内酰胺类抗生素 ⑤KPC型酶检测 能水解除头霉素以外的所有β-内酰胺类抗生素,对美罗培南的水解能力最强。 2.重要耐药菌的检测 金黄色葡萄球菌 肠球菌:耐药机制: 耐万古霉素肠球菌的vanA 基因转移的 金黄色葡萄球菌菌体内 二)检验报告单的正确读取 与抗菌药物的合理使用 临床细菌抗菌药物敏感试验结果的含义和应用方法: 药敏试验检验报告单列出了抗菌药物敏感性(耐药性)结果。一般认为,这张报告单中列出的药物敏感性结果就是可供选择的药物,而报告单中未出现的药物没有选用的依据,这种观点是不全面的。 葡萄球菌用药原则 A组(首选药物)初级试验的抗菌药物和常规报告的抗菌药物 青霉素、苯唑西林(头孢西丁结果)、阿奇霉素或红霉素、克拉霉素或红霉素 B组(选择性地报告)初级试验的抗菌药物和选择报告的抗菌药物 克林霉素、万古霉素、达托霉素、利奈唑烷、甲氧苄啶/磺胺甲噁唑、环丙沙星或左氧氟沙星或氧氟沙星 C组(替代性或补充性)补充试验和选择菌药物报告的抗菌药物 加替沙星或阿莫西林、氯霉素、庆大霉素、利福平、四环素、 达福普汀、 奎奴普丁/ U组(泌尿道感染用 )补充试泌尿道的抗菌药物 洛美沙星或诺氟沙星、磺胺异噁唑呋喃妥因、 甲氧苄啶 MRSA对所有β-内酰胺类,包括酶抑制剂复合物药和碳青酶烯类均耐药; …… ß–内酰胺类抗菌药物--R 1.青霉素类 (penicillins):天然青霉素、耐青霉素酶青霉素、广谱青霉素 2.头孢菌素类 (cephaolosporin) 一代头孢菌素:对革兰阳性菌有较强作用 二代头孢菌素: 对产ß–内酰胺革兰阴性菌有作用 三代头孢菌素:注射:头孢噻肟 、头孢曲松、头孢他定、头孢哌酮 四代头孢菌素:头孢匹罗、头孢吡肟 3.其他ß–内酰胺类抗生素与ß–内酰胺酶抑制剂 (1)单环ß–内酰胺类 (monobactans):氨曲南和卡芦莫南。 (2)头霉素类: ①头霉素(cephamycins)抗生素:有头孢西丁、头孢替坦、头孢美唑.对革兰阳性菌有较好的抗菌活性,对厌氧菌有高度抗菌活性,但对铜绿假单胞菌耐药。 ②氧头孢烯类(oxacephems):具有三代头孢菌素的特点,抗菌谱广,对产ß–内酰胺酶阴性菌有很强的抗菌作用,对产酶的金黄色葡萄球菌也具有一定的抗菌活性。 (3)碳青霉烯类抗生素:碳青霉烯类(carbapenems):亚胺培南、美洛培南、比阿培南、帕尼培南。 (4) ß–内酰胺酶抑制剂: ①克拉维酸②舒巴坦③三唑巴坦 首都医科大学附属北京友谊医院检验报告单 姓名ⅹ ⅹ 性别ⅹ 病历号ⅹ ⅹ 临床诊断ⅹ …… 标本来源:?泌尿道标本 致病菌:MRSA 药敏试验结果 : 抗菌药物的PK/PD理论 抗菌药临床药理学的研究范畴 药代动力学(Pharmacokinetics,PK) 研究抗菌药的吸收、分布和清除,这三个方面结合在一起决定着药物在血清、体液和组织中浓度的时间过程,这一过程与药物的剂量有一定的关系。 药效动力学(Pharmacodynamics,PD) 研究药物的作用机制以及药物浓度与药物效果、药物毒性的关系。 恰当的给药剂量、给药间隔和疗程 (right dosage , right interval,right time of therapy ) 药物的穿透性: %组织/血清 七种抗生素肺组织穿透性比较 比较 --ESBLs 克雷伯菌属、大肠埃希菌和奇异变型杆菌中的产ESBLs菌株应报告: 对所有青霉素类及氨曲南耐药。 …… 比较 --ESBLs ß–内酰胺类抗菌药物—部分R 部分S 1.青霉素类 (penicillins):天然青霉素、耐青霉素酶青霉素、广谱青霉素 2.头孢菌素类 (cephaolosporin) 一代头孢菌素:对革兰阳性菌有较强作用 二代头孢菌素: 对产ß–内酰胺革兰阴性菌有作用 三代头孢菌素:注射:头孢噻肟 、头孢曲松、头孢他定、头孢哌酮 四代头孢菌素:头孢匹罗、头孢吡肟 3.其他ß–内酰胺类抗生素与ß–内酰胺酶抑制剂 (1)单环ß–内酰胺类 (monobactans):氨曲南和卡芦莫南。 (2)头霉素类: ①头霉素(cephamycins)抗生素:有头孢西丁、头孢替坦、头孢美唑.对革兰阳性菌有较好的抗菌活性,对厌氧菌有高度抗菌活性,但对铜绿假单胞菌耐药。 ②氧头孢烯类(oxacephems):具有三代头孢菌素的特点,抗菌谱广,对产ß–内酰胺酶阴性菌有很强的抗菌作用,对产酶的金黄色葡萄球菌也具有一定的抗菌活性。 (3)碳青霉烯类抗生素:碳青霉烯类(carbapenems):亚胺培南、美洛培南、比阿培南、帕尼培南。 (4) ß–内酰胺酶抑制剂: ①克拉维酸②舒巴坦③三唑巴坦 三)细菌耐药基因的检测(研究热点,检验科医师) (1)检测方法 分子生物学方法如PCR技术 基因芯片技术 (2)临床意义 用于难以判断菌株对某种药物是 S/R?及对生长慢(如TB菌)或难于培养的病原(如肺炎支原体、衣原体等)的耐药基因检测, 及时治疗选药。流行病学研究等 参考文献

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    《ICU临床细菌学检验和药物敏感试验结果解读PPT课件》是由用户huangyixuan于2021-07-24上传,属于医疗健康ppt。

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